产品说明介绍

  腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）是一种非致病性的单链DNA病毒，其基因组约为4.7 kb，经改造而成的重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）删除了病毒蛋白编码序列，转而装载治疗性转基因或基因编辑工具。rAAV凭借其低免疫原性、高安全性、宿主细胞范围广、扩散能力强、体内表达时间长、能感染分裂与非分裂细胞等优势，成为一种在体外或体内实验中均被广泛使用的病毒载体。多纳生物提供高质量的AAV病毒包装服务，我们开发出一系列专有技术，从病毒滴度、活性、纯度以及一致性等方面显著提升了AAV病毒包装工艺水平。

病毒包装服务流程

病毒包装服务详情

蛋白纯度表征

  衣壳纯度检测能直观反映蛋白杂质情况，而SDS-PAGE电泳结合银染，通过观察蛋白杂条带数量，在鉴别AAV的同时也能表征其纯度，是针对AAV杂质蛋白最简单直观的方法。AAV衣壳蛋白含有3种亚基VP1、VP2、VP3，且所占比例为VP1：VP2：VP3=1:1:10。通过电泳分离，高纯的AAV在SDS-PAGE分析时有且仅有三条带。多纳医药纯化后的AAV9-mCherry12%SDS-PAGE与银染结果如下：

空壳率表征

  在透射电镜下，包装了基因的病毒显示为实心颗粒，而空载体因密度低显示出空洞，因此负染后可直接观察 AAV 病毒颗粒的形态和结构，区分空壳病毒（实心）和完整病毒（空心），并评估病毒的纯度。在透射电镜下，结果如下：

AAV病毒感染实验实例

不同启动子的AAV9感染细胞

  感染HEK293T细胞，48小时后在荧光显微镜下查看感染效果，结果如下：

AAV体内感染

  通过脑立体定位注射不同启动子控制的AAV9-Mcherry（5E10vg），注射三周后解剖小鼠进行离体成像（A、B），查看mcherry在小鼠各组织中的表达量。取脑组织进行冰冻切片，使用荧光显微镜查看海马区的表达情况（C、D、E）。其中：A与C：特异性启动子【AAV9-hSYN-Mcherry】；B与D：广谱性启动子【AAV9-CMV-Mcherry】； E：未注射病毒的空白对照